回顧 2017 年 4 月～ 2018 年 6 月在我院產(chǎn) 科門診選擇無創(chuàng) DNA 進(jìn)行產(chǎn)前篩查的孕婦共計(jì) 6903 例， 孕婦年齡為 17 ～ 44 歲，孕周為 12w 以上，近期未接受過 移植手術(shù)、異體輸血、干細(xì)胞治療，BMI 指≤ 28 的產(chǎn)前孕 婦進(jìn)行分類指征統(tǒng)計(jì)，按照高齡妊娠（≥ 35 歲）、血清學(xué) 篩查高風(fēng)險(xiǎn) / 臨界風(fēng)險(xiǎn)、NT 增厚、B 超軟指標(biāo)異常 / 結(jié)構(gòu) 異常、雙胎 /IVF-ET 妊娠、錯(cuò)過其它篩查時(shí)機(jī)（≥ 22w）、 其它檢測（流產(chǎn)≥ 2 次和有不良妊娠或生育史）及自愿要 求檢測進(jìn)行分指征統(tǒng)計(jì)，若同一位孕婦存在兩種或多種指 征，按上述順序只填寫最靠前的一次指標(biāo)，同時(shí)統(tǒng)計(jì)二胎 例數(shù)。NIPT 產(chǎn)前篩查提示陽性結(jié)果的孕婦共 77 例，其中 13 例拒絕產(chǎn)前診斷直接引產(chǎn)，2 例流產(chǎn)，剩余 62 例均做同 意羊膜腔穿刺術(shù)進(jìn)行產(chǎn)前診斷，對(duì)羊水進(jìn)行培養(yǎng)及核型分 析，對(duì)微缺微重同時(shí)進(jìn)行 CMA 檢測，最終確診為陽性例 數(shù)為 34 例，其中目標(biāo)檢測疾病 T21/T18/T13 篩查陽性 31 例， 診斷陽性 20 例。并按時(shí)進(jìn)行隨訪，記錄妊娠結(jié)局。

文庫構(gòu)建試劑、測序芯片等均購 置于北京博奧生物公司。主要使用儀器 BioelectronSeq 4000高通量測序儀購置于北京博奧生物公司、實(shí)時(shí)定量 PCR 采 用 SYBR Green Realtime PCR Master Mix 在 ABI 7500 Realtime PCR Systems（Applied Biosystems）、博迅培養(yǎng)箱、 北昂核型分析軟件。

DNA 提取及文庫構(gòu)建、文庫定量、按照公 式稀釋倍數(shù) = 混合文庫濃度（nM）*1000/ 上機(jī)濃度（pM） 進(jìn)行混合文庫 pooling 后上機(jī)測序。

測序儀進(jìn)行高通量測序，基于 每個(gè)基因芯片中的反應(yīng)孔會(huì)讀出一段短序列，成為 read， 根據(jù)染色體 N 上的 unique read 的總數(shù) / 全部常染色體上 unique reads 總數(shù)，Z-score= 樣本 %chrN- 參考樣本的 %chrN 的平均值 / 參考樣的 %chrN 的標(biāo)準(zhǔn)差，按照質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)和數(shù) 據(jù)分析軟件進(jìn)行測序分析。

篩查陽性孕婦均在超聲引導(dǎo)下抽取 羊水 20ml，分別置于 2 個(gè)培養(yǎng)瓶中，每瓶 10ml。

對(duì)羊水細(xì)胞培養(yǎng)、收獲并制片、G 顯帶后進(jìn)行核型分析，必要時(shí)加做 C 顯帶。

對(duì)需要做 CMA（SNParray）檢測的孕婦，我院進(jìn)行轉(zhuǎn)診至上級(jí)醫(yī)院。

采用 SPSS 19.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 定性資料用率（%）表示，組間比較采用 χ2 檢驗(yàn)。P ＜ 0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

我院共檢測無創(chuàng)產(chǎn)前 篩查檢測 6903 例，無創(chuàng)產(chǎn)前檢測中占比最多的 主要為自愿要求檢測組例數(shù)為 4651 例，占無創(chuàng)總檢測比例 的 67.38%，其次為高齡妊娠（≥ 35 歲）檢測例數(shù) 1366 例， 占無創(chuàng)總檢測比例的 19.78% ；血清學(xué)篩查高風(fēng)險(xiǎn) / 臨界風(fēng) 險(xiǎn)檢測例數(shù) 495 例，占無創(chuàng)總檢測比例的 7.17% ；檢測占 比最少的兩項(xiàng)指征分別是 NT 增厚檢測例數(shù) 11 例，B 超軟 指標(biāo)異常 / 結(jié)構(gòu)異常檢測例 28 例，NT 增厚和 B 超異常共 計(jì)占比僅為無創(chuàng)總?cè)藬?shù)的 0.56% ；雙胎和 IVF-ET 妊娠檢 測例數(shù) 129 例，錯(cuò)過其它篩查時(shí)機(jī)檢測例數(shù) 181 例，它們分別占無創(chuàng)檢測總數(shù)的 1.87% 和 2.60% ；其它檢測例數(shù)（自 然流產(chǎn) 2 次以上及不良妊娠史）42 例，占總檢測例數(shù)的 0.61%。各類指征中二孩（含以上）合計(jì)檢測例數(shù)為 3521 例占總檢測例數(shù)的 51%，其中高齡二孩 921 例占總檢測數(shù) 為 67.4%，自愿檢測 2243 例占比 48.2%，國家開放二孩政 策以來有效推動(dòng)生育率的增加。總體陽性檢出率以高齡妊娠 （≥ 35 歲）和自愿檢測指征例數(shù)為主，最高檢出率來自 T21 錯(cuò)過篩查時(shí)間指征，其余不同指征檢出率均較低，維持在 0～1.1% 之間的檢出率，篩查陽性分布從 0 到 22 例不等， 因此確診例數(shù)較少。針對(duì) T21 三體陽性，檢出率 最高的為錯(cuò)過其它篩查時(shí)間檢出率為 2.21%，其次為高齡妊娠 0.73% 和雙胎 /IVF-ET 妊娠 0.78% 的檢出率，血清學(xué) 篩查高 / 臨界風(fēng)險(xiǎn)為 0.40%，最低檢出率為自愿組 0.22% ； 針對(duì) T18 三體陽性，檢出率最高的為錯(cuò)過其它篩查時(shí)間檢 出率為 1.10%，其次為 T18 高齡組指征，檢出率為 0.37%， 最低為 T18 自愿組 0.06% ；針對(duì) T13 三體，T13 自愿組和 高齡出檢出率相近，分別為檢出率為 0.09% 和 0.07% ；針 對(duì)性染色體異常 SCA（Sex chromosome abnormality）陽性， 錯(cuò)過其它篩查時(shí)間篩查檢出率為 0.55%，SCA 自愿組和高 齡組檢出率相近，分別為檢出率為 0.47% 和 0.44% ；針對(duì) 常染色體異常檢出率，高齡組檢出率為 0.22%，略高于 0.19% 自愿組檢出率，確診為常染色體異常的 1 例來源于母親遺 傳，正常分娩并跟蹤隨訪，無異常表現(xiàn)。

引起假陽性的原因主要有以下三方面因素 ：標(biāo)本的 來源 ：無創(chuàng) DNA 通過采集孕婦外周血，從中分離胎兒的游 離 DNA，這部分 DNA 來源于胎盤的脫落細(xì)胞，若孕婦 胎盤存在拷貝數(shù)變異或者異常時(shí)，往往會(huì)在無創(chuàng)檢測中提 示高風(fēng)險(xiǎn)，而這類高風(fēng)險(xiǎn)其實(shí)與胎兒本身是否存在染色體 異常關(guān)系較小，此類假陽性可采用產(chǎn)婦分娩后對(duì)胎盤不同 部位進(jìn)行取材后再進(jìn)行高通量檢測，寄希望能找到胎盤與 NIPT 篩查陽性的關(guān)系研究 ；母體基因組本身存在拷貝數(shù)變 異 ：如存在惡性腫瘤時(shí)，導(dǎo)致母體體內(nèi)存在大量的腫瘤細(xì) 胞，此類細(xì)胞 DNA 會(huì)增加，直接導(dǎo)致無創(chuàng)檢測指標(biāo)提示 存在異常，此類也會(huì)導(dǎo)致篩查假陽性情 ；測序技術(shù)本身的 局限性 ：高通量測序技術(shù)在短時(shí)間內(nèi)可對(duì)大量數(shù)據(jù)進(jìn)行檢 測分析，但是容易出現(xiàn)錯(cuò)誤概率，目前測序平臺(tái)的錯(cuò)誤率 有 Q20/Q30/Q40 等級(jí)別，如 Q20 平臺(tái)，即提示存在 1% 的 錯(cuò)誤率，這會(huì)導(dǎo)致數(shù)據(jù)結(jié)果異常，由于是高通量測序而非 Sanger 測序，因此會(huì)出現(xiàn)覆蓋率和測序深度等問題，若降 低芯片上樣量，在一定程度上可以提高測序準(zhǔn)確性，但是 成本較高。因此特別強(qiáng)調(diào) NIPT 高風(fēng)險(xiǎn)不能作為引產(chǎn)指征， 必須進(jìn)行產(chǎn)前診斷才能判定，在臨床咨詢工作中應(yīng)提高孕 婦對(duì) NIPT 這項(xiàng)新技術(shù)的風(fēng)險(xiǎn)認(rèn)知，且強(qiáng)調(diào)產(chǎn)前診斷費(fèi) 用報(bào)銷問題，減輕其經(jīng)濟(jì)壓力，孕婦在根據(jù) NIPT 提示高 風(fēng)險(xiǎn)時(shí)，是否接受產(chǎn)前診斷除與遺傳咨詢相關(guān)外，還與孕 婦本身的身心狀態(tài)、文化背景和教育認(rèn)知水平，經(jīng)濟(jì)狀況 等因素有關(guān)，應(yīng)盡最大程度避免孕婦因上述問題而導(dǎo)致選 擇終止妊娠。 



 

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