在油田注入水的檢測系統中，細菌檢測是重要 指標。油田注水系統中，腐蝕性細菌造成金屬腐蝕， 管路堵塞，進而導致注水壓力逐年提高，地層壓力 逐步降低，嚴重影響油田正常生產。細菌檢測結果的準確性，對指導油田生產具有重要作用。在 《SY/T 0532-2012 油田注入水細菌分析方法絕跡稀釋法》 中，推薦對鐵細菌、硫酸鹽還原菌和腐生菌這三種 注水常見危害細菌采用絕跡稀釋法進行測定。

95%乙醇（分析純），脫脂棉，1 mL 注射器（0.02 mL 分度），上海博迅 BPX-272 電熱恒溫培養箱，沃特 KBC 系列細菌測試瓶。

根據需要對鐵細菌、硫酸鹽還原菌和腐生菌分 別進行單組測試和多組測試。多組實驗用五個裝有 相應菌類培養基測試瓶依次標號。 用酒精棉球對手及開蓋后的測試瓶進行消毒； 用無菌注射器吸取 1 mL 水樣注入測試瓶中，搖勻； 另取無菌注射器，從一號瓶吸取 1 mL 水樣注入二號瓶，搖勻；依次操作至最后一個樣品瓶為止。放 入 35 ℃恒溫培養箱中培養。培養硫酸鹽還原菌 14 天觀察，測試瓶中液體由無色變為黑色，即為陽性 結果。培養腐生菌 7 天后觀察，液體由紅變黃或渾 濁，為陽性結果。培養鐵細菌 7 天后觀察，測試瓶 中液體產生渾濁或紅棕色沉淀，為陽性結果。

根據重復次數（測試組數)的每級結果查《SY/T 0532-2012 油田注入水細菌分析方法絕跡稀釋法》 附表附錄，乘以相應的級數得出檢測結果。

測量不確定度的來源包括 A 類不確定度和 B 類 不確定度。用統計分析的方法對規定測量條件下測 得的量值進行測量不確定度分量評定的方法為 A 類 不確定度；基于量值、儀器準確度、校準記錄等方 法評定的不確定度為 B 類不確定度。經分析，絕跡 稀釋法結果不確定度的來源主要是取樣和結果重復 性引入的不確定度。其中屬于 A 類不確定度的為結 果重復性引入的不確定度，屬于 B 類不確定度的為 取樣 1 mL 引入的不確定度。

樣品的梯度稀釋采用 1 mL 玻璃注射器，進行 反復 5 次吸取注射。根據玻璃量器規定，1 mL 玻璃 注射器（A 級）允差為±0.008。其標準不確定度 0.008/√3=0.004 6。在 5 次使用過程中產生的不確定 度為√5 ? 0.004 6?=0.010 3。在室溫 25 ℃操作時， 根據水的膨脹系數，5 次使用過程中產生的不確定度為 5×5×2.1×10-4÷√3=0.003 0。則梯度稀釋過 程產生的不確定度 U 稀 =√ 0.010 3? ? 0.003? =0.0107。取樣時引入的相對 標準不確定度為 Urel(稀)= 0.010 7/5=0.002 1。

（1）絕跡稀釋法是結合了微生物學和統計學的 一種定量檢測法。待測樣品經稀釋培養后，根據生 長的最高稀釋濃度和最低稀釋濃度，應用泊松分布 計算出樣品最大可能數。絕跡稀釋法所得到結果本 身就包括了一定的概率。但是在實際操作過程中， 吸取溶液等操作步驟都會另外帶入不確定度。因此需對整個過程進行不確定度評價。

（2）影響整個過程的不確定度因素很多，除了 上述不確定度之外，還有樣品保存引起的不確定度， 檢測環境引起的不確定度，細菌瓶的質量引起的不 確定度，恒溫培養箱培養過程中的不確定度，人員 讀數引起的不確定度。它們對合成不確定度的貢獻 較小，所以在此次評定過程中沒有計入上述因素。

（3）細菌是以幾何速度增殖，所以不確定度評 定過程按取對數計算比較合理。

（4）在 A 類不確定度和 B 類不確定度同時評 定時，儀器分辨力引入的不確定度和重復性引入的 不確定度之間，應取其大者。